細菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）

簡要描述：產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細菌膜蛋白提取試劑盒（雙向電泳用）是一種快速高效的高產膜蛋白提取試劑盒。細菌膜蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陽性和陰性細菌中提取膜蛋白，可用于純化膜蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了保證。提取的蛋白樣品中不含鹽，可以直接用于等電聚焦、雙向電泳等。如下游實驗不需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，可選用貝博用于Western Blotting、普通蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗的其他試劑盒（相關產品BB-3151）。

產品型號：
廠商性質：生產廠家
更新時間：2025-01-01
訪問量：89

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產品分類

CLASSIFICATION

蛋白質生物學

蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產品

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詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

雙向電泳

適用樣本

細菌

產品特點

1、使用方便。
2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產品應用

雙向電泳

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 提取液A在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。

?

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 離心收集菌體，用PBS洗菌體2次。
3. 按每100-150mg濕重菌體樣本加入500ul冷的提取液A（大約菌體和提取液體積比1:3-1:5，淹沒菌體即可），吹打混勻，在2-8℃振蕩1-2小時，至菌體裂解，菌體沉淀減少。
4. 將菌液在2-8℃低溫下12000×g離心5分鐘，取上清。
5. 在37℃水浴10分鐘。
6. 在37℃， 1000×g離心3分鐘。
7. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層，大約50ul液體。
8. 用1-2倍體積的膜蛋白溶解液溶解該溶液，即得細菌膜蛋白樣品。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細胞上樣量。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。

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