蛋白質總巰基檢測試劑盒（總半巰基）

2-8℃ 避光

1.試劑拆封后請盡快使用完！
2.試劑A低溫保存后可能會有結晶析出，可以置室溫搖勻溶解或者37℃水浴溶解搖勻。

6個月

分光光度計

蛋白質、抗體等

分光光度計

1.分光光度計
2.恒溫水浴鍋
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.生理鹽水
2.純水
3.蛋白定量試劑盒

1.比色皿
2.試管
3.吸頭
4.一次性手套

1.試劑A低溫保存后可能會有結晶析出，可以置室溫搖勻溶解或者37℃水浴溶解后搖勻再使用。
2.試劑B2干粉開蓋使用前先敲入瓶底部，防止開蓋時灑落導致?lián)p失。
3.試劑C2干粉開蓋使用前先敲入瓶底部，防止開蓋時灑落導致?lián)p失

試劑配制：
1. 使用前，準確吸取10 ml試劑B1加入試劑B2干粉，充分溶解混勻，即成試劑B工作液，4℃避光保存?zhèn)溆谩?br>2. 使用前，準確吸取10 ml試劑C1加入試劑C2干粉，充分溶解混勻，即成試劑C工作液，4℃避光保存?zhèn)溆谩?br>【注】：
? 一次用不完的試劑工作液可以根據(jù)實驗需要分裝后-20℃凍存。

樣本處理：
1. 蛋白質/抗體等液體樣本：直接檢測或稀釋后檢測。
檢測前進行蛋白濃度測定（mg/ml，g/L）。
2. 固體粉末用試劑A溶解后測定。蛋白濃度范圍在1-10mg/ml均可。
進行蛋白濃度測定（mg/ml，g/L）。

總巰基的測定
1. 待測蛋白樣品100 μl加入700 μl試劑A，充分混勻，室溫或37℃靜置1-4小時。
2. 再加入100 μl試劑B工作液，充分混勻，在室溫或37℃靜置10-30分鐘。
3. 加入100 μl試劑D，充分混勻。
4. 冰浴或4℃冰箱靜置30分鐘以上。
【注】：
? 可以4℃靜置過夜。
5. 在4℃，12000×g以上條件下離心10分鐘。
6. 小心移除上層清液丟棄，留沉淀。
【注】：
? 盡可能吸干液體，小心不要吸走沉淀。
7. 加入100 μl試劑E到離心管中，洗滌沉淀。在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。小心移除棄上清，留沉淀。
【注】：
? 重復此步驟兩次。
? 盡可能吸干液體，小心不要吸走沉淀。
8. 用900 μl試劑F溶解沉淀。
【注】：
? 用移液器充分吹打混勻。
? 沉淀不好溶解時可以超聲助溶。
9. 加入100 μl試劑C工作液，充分混勻。
10. 置室溫靜置10分鐘。412 nm，0.5 cm光徑，測定OD值。

巰基含量計算：
總半巰基含量（mmol/g ；mmol-SH/g-Protein）
= 測定吸光度÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
? 以上以0.5cm光徑檢測設備為例，如果實際使用的檢測設備是采用1cm光徑，將計算公式中的0.5換成1即可。

【注】：
14.15 mM/cm為毫摩爾消光系數(shù)；
0.5 cm為光徑；
10 為反應總體積/樣品取樣量

1.巰基含量低于預期？
可能是樣品中的游離巰基已經(jīng)被氧化。
需要限度地減少樣品制備與分析之間的時間間隔，盡快完成分析測定?？梢栽跇悠分屑尤?-5 mM 的EDTA以螯合可能氧化巰基的二價金屬離子。

2.需要繪制標準曲線嗎？
由于Ellman反應的顯色產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)高且穩(wěn)定，因此可以不必繪制標準曲線，直接通過摩爾消光系數(shù)計算即可。
如果需要可以選擇貝博其它含有標準品的試劑盒（相關產(chǎn)品：BB-472462或者BB-472463）。
如果需要自行繪制標準曲線，可以使用半鹽酸鹽一水合物（CAS#：7048-04-6 MW=175.63）做標準品，用反應緩沖液配制1.5 mM的標準品，然后分別稀釋成1.25 mM、1.0 mM、0.75 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0 mM等不同濃度的標準品。取900 μl加入100 μl試劑C工作液，充分混勻。置室溫靜置10分鐘。412 nm，測定OD值。

1.HanQuanWen et al.
Effect of chirality of cysteine on the cell growth and photo-fermentative hydrogen production by using acetate as substrate
Fuel 2021 （IF=6.609）

2.Yan Yan et al.
Nanosized functional miRNA liposomes and application in the treatment of TNBC by silencing Slug gene
International Journal of Nanomedicine 2019 （IF=6.400）

3.HanQuanWen et al.
Enhanced photo-fermentative hydrogen production by synergistic effects of formed biofilm and added L-cysteine
Renewable Energy 2019 （IF=8.001）

4.MengGe Sun et al.
Targeting Epirubicin Plus Quinacrine Liposomes Modified with DSPE-PEG2000-C(RGDfK) Conjugate for Eliminating Invasive Breast Cancer
Journal of Biomedical Nanotechnology 2015 （IF=5.068）